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流式熒光法不僅能高通量檢測(cè)抗原,還能高通量檢測(cè)核酸。 比如說(shuō)常見(jiàn)的項(xiàng)目HPV分型,就非常合適用流式熒光法檢測(cè)。然而如果僅僅只靠核酸雜交來(lái)獲得信號(hào),很難達(dá)到理想的靈敏度(雖然是懸浮芯片,但也是固液相反應(yīng)效率肯定不如液液反應(yīng)效率)。因此懸浮芯片會(huì)采用先擴(kuò)增,再雜交的方法來(lái)放大信號(hào),提高檢測(cè)的靈敏度。為什么不在球上直接做擴(kuò)增反應(yīng)了。這涉及到了熒光編碼微球是否耐熱的問(wèn)題。為了考察碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球是否耐熱,我們做了一下研究工作。
碧芯生物的Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球能不能做雜交?
可以,在95度 3分鐘,48度1小時(shí)的雜交條件下,能獲得較好的熒光信號(hào)(條件還在優(yōu)化中,歡迎咨詢)
能不能直接再球上擴(kuò)增,碧芯生物做了兩個(gè)嘗試?
1 等溫?cái)U(kuò)增。在球上直接進(jìn)行滾環(huán)擴(kuò)增(RCA, 文章已發(fā)表,doi.org/10.1016/j.cclet.2023.108141)和重組酶介導(dǎo)鏈替換核酸擴(kuò)增技術(shù)(RAA,文章在投)
2 PCR反應(yīng)。目前市面上多數(shù)的熒光編碼微球都難以耐受PCR的熱循環(huán),因此很少見(jiàn)到有直接在磁性熒光編碼微球上進(jìn)行PCR再流式高通量分析核酸分子的產(chǎn)品。為了填補(bǔ)這一塊的空白,碧芯生物科技從我們?cè)谑鄣?微米羧基修飾的磁性熒光編碼微球中篩選出由23種耐95度的磁性熒光編碼微球的陣列,供需要在微球表面進(jìn)行PCR反應(yīng)的用戶選擇。圖1為23群微球的陣列)
圖1:左圖為23群磁性熒光編碼微球未PCR的流式圖;右圖為23群微球經(jīng)過(guò)一個(gè)PCR流程后的流式圖
綜上所述, 碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球有著的熱穩(wěn)定性,不管您是PCR完了做雜交,還是直接在球上PCR, 碧芯生物Beadstar-mPlex®磁性熒光編碼微球都可以幫您建立穩(wěn)定的檢測(cè)體系。
PCR熱循環(huán)程序:
溫度(℃) | 時(shí)間(s) | 循環(huán)數(shù)(Cycle) |
94 | 180 | 1 |
94 | 30 |
31 |
58 | 30 | |
72 | 30 | |
72 | 300 | 1 |
4 | holding | 1 |
18189751352